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    細(xì)胞傷口愈合

    發(fā)布時(shí)間： 2023-01-16　　點(diǎn)擊次數(shù)： 996次

    原理

    在單層培養(yǎng)細(xì)胞間制作劃痕以產(chǎn)生愈傷區(qū)域，然后監(jiān)控該傷口周?chē)?xì)胞的向劃痕遷移的現(xiàn)象，即傷口愈合。改變細(xì)胞遷移和/或生長(zhǎng)的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量，適用于自動(dòng)化系統(tǒng)高通量篩選。

    材料與儀器

    人MDA-MB-231細(xì)胞
    DMEM培養(yǎng)基 胎牛血清 PBS 戊二醛 乙醇 結(jié)晶紫
    24孔培養(yǎng)板 槍頭 細(xì)胞培養(yǎng)儀

    步驟

    1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。


    2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長(zhǎng)24小時(shí)后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達(dá)到70-80%。


    3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過(guò)孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號(hào)的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。


    4.在垂直與第一條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。


    5.劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細(xì)胞。


    6.每孔添加新鮮培養(yǎng)基。


    7.（培養(yǎng)基中含有某些成分，如抑制/促進(jìn)細(xì)胞遷移和/或增殖的化學(xué)物質(zhì)）


    8.細(xì)胞生長(zhǎng)48小時(shí)（或根據(jù)時(shí)間需要）。


    9. 1xPBS清洗細(xì)胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。


    10. 1%的結(jié)晶紫（2%乙醇溶解）染色30分鐘。

    注意事項(xiàng)

    為了降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可變性，建議每孔選擇多個(gè)視野觀察，每組做多個(gè)重復(fù)。

    常見(jiàn)問(wèn)題

    gap的距離可通過(guò)Photoshop或ImagJ軟件測(cè)量，為了降低實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可變性，建議每孔選擇多個(gè)視野觀察，每組做多個(gè)重復(fù)。


    以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點(diǎn)擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

     

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